Obtaiment of Pudu (Pudu pudu) deer embryos by the somatic nuclear transfer technique

RESUMEN: Los objetivos de este trabajo fueron los de producir embriones de pudú, obtenidos por la transferencia de núcleos de fibroblastos de la oreja de pudú en ovocitos de un rumiante domésticos que es el bovino. Para posteriormente en un trabajo futuro proceder a la transferencia de embriones de pudú, al útero de hembras receptoras sincronizadas de otra especie. Se obtuvieron biopsias de 1 mm aproximadamente del borde externo de la orejas de dos ciervos pudu machos del jardín zoológico Buin-Zoo, Santiago de Chile. Las líneas celulares han sido establecidas y conservadas según los protocolos utilizados para las bovinos. Los ovocitos son obtenidos por punción del complejo cúmulos-ovocito (COC).desde ovarios de vacas recuperados del matadero. Cada ovocito es enucleado y fusionado con un fibroblasto aislado insertado bajo la zona pelúcida. La fusión de membranas celulares es obtenida por choques eléctricos. En cuanto a la cronología, observamos que al segundo día se forma una etapa de dos blastómeras, al tercer día mórulas de 8 a 16 células, y desde el cuarto día se ha diferenciado como blastocisto, el cuál al séptimo día termina por eclosionar de la zona pelúcida.La obtención de blastocistos embrionarios indica que es posible obtener embriones de pudú mediante clonaje heteroespecífico, aunque, el porcentaje de éxito obtenido es relativamente bajo. Queda aun por verificar la viabilidad de los embriones así obtenidos después de la transferencia in útero.

Attempts at Applying Cloning to the Conservation of Species in Danger of Extinction / Intentos de Aplicar la Clonación en la Conservación de Especies en Riesgo de Extinción

The somatic cloning by transfer of the nuclei of differentiated adult cells to previously enucleated oocytes is a promising technique for the production of embryos of high genetic value. The better mastering of somatic cloning gives us the possibility to produce embryos from endangered species. The huemul is an Andean native deer, that has been declared an endangered species, it holds a great patrimonial value and it is a Chilean national emblem. In Chile the huemul has the status of protected animal on thirteen Parks and National Reserves managed by Corporacion Nacional Forestal (CONAF). This protection, however, is considered insufficient due to the few geographical connections between the different protected areas. Furthermore, a great proportion of these areas are not subjected to use or they do not constitute adequate habitats. Many authors have proposed that the use of biotechnological methods in reproduction and assisted procreation may help conservational programs orientated to the protection of deer species threatened by extinction. All the anterior prompted us to initiate this study concerning the production of cloned huemul embryos.

El clonaje somático por transferencia del núcleo de células diferenciadas adultas a un ovocito, al que se le ha extraído el núcleo (enucleado), es una técnica prometedora para la producción de embriones de alto valor genético. El mejor dominio del clonaje somático da la posibilidad de producir embriones de especies amenazadas de extinción. El huemul es un ciervo andino autóctono, declarado como especie en peligro de extinción. tiene un gran valor patrimonial, y es emblema de la nación chilena. En este país, el huemul se encuentra protegido en trece Parques y Reservas Nacionales, manejadas por la Corporación Nacional Forestal (CONAF). Sin embargo, su protección se considera insuficiente debido a la baja conectividad entre las áreas protegidas y además, una gran proporción de estas áreas no son utilizadas o no constituyen un hábitat adecuado. Para las especies de cérvidos en vías de extinción el uso de biotecnología reproductiva y métodos de procreación asistida, según varios autores, pueden ayudar a los programas de conservación. Las técnicas clásicas de producción de embriones basados en superovulación, inseminación artificial y transferencia embrionaria,en los cérvidos, han resultado muy dificultosa. Esto, sumado a las características del huemul, que no permite su estabulación en cautiverio, nos ha movido a iniciar un estudio tendiente a la producción de embriones clonados de esta especie.

Clonación, producción de quimeras y células pluripotenciales / Clonation, production of chimeras ans pluripotencial cells

La Biología del Desarrollo y la Biotecnología han avanzado enormemente en los últimos años. Los estudios que se están realizando actualmente con nuevas técnicas moleculares, nos conducen a una nueva era en el diagnóstico y en el tratamiento de muchas enfermedades congénitas. Actualmente, se ha logrado aplicar los conocimientos derivados de ella, con incipiente éxito, en los aspectos productivos y también en la terapia de distintas enfermedades del Hombre y de otros animales y, por último, existen importantes perspectivas en la protección de especies amenazadas. En este Review, se analizan algunos de los aspectos técnicos más interesantes de la clonación, producción de quimeras y obtención de células pluripotenciales, como también los objetivos y proyecciones en el campo veterinario y de la salud animal y humana.